盐酸多柔比星脂质体的制备及体外质量评价
盐酸多柔比星脂质体的制备及体外质量评价
来源
中国医院药学杂志 2020年月 第40卷第8期
作者
王利媛，林华庆，刘荣，王秋云，潘颖彬
广东药科大学
广东省药物新剂型重点实验室
广州玻思韬控释药业有限公司
摘要
目的:制备盐酸多柔比星脂质体并进行体外质量评价，以期实现自制脂质体质量与市售盐酸多柔比星脂质体注射液Doxil一致，并为其生物体内等效及产业化提供研究基础。
方法:采用乙醇注入法结合硫酸铵梯度法制备盐酸多柔比星脂质体，以包封率为评价指标通过单因素筛选和正交试验优化制备工艺，以市售Doxil为参比制剂，对比最优工艺制得的脂质体与市售Doxil的微观结构、粒径大小及分布、Zeta电位、相变温度、包封率等理化指标，考察最优工艺制得的脂质体与市售Doxil在加速条件的体外释放及储存条件下稳定性情况。
结果:自制盐酸多柔比星脂质体最优制备工艺为高速剪切速率13 000 r·min-1，挤出3次，载药孵育温度65℃，载药孵育时间60 min，最优工艺制得的脂质体与市售Doxil外观均为椭圆形，平均粒径分别为(90.)nm(n=3)和(89.)nm(n=3)，分布较为均匀，Zeta电位分别为(-41.)mV(n=3)和(-44.)mV(n=3)，相变温度范围相同，包封率分别为98.0%和97.9%，体外释放较为一致，稳定性好。
结论:采用最优工艺制备的盐酸多柔比星脂质体制备工艺可行，与市售Doxil相比，理化指标及体外释放无明显差异，自制脂质体体外质量良好，符合实验预期。
关键词
盐酸多柔比星;脂质体;正交试验;质量评价
盐酸多柔比星(doxorubicin hydrochloride)又名盐酸阿霉素，是从波赛(peitues)链霉菌的突变菌株中发现的一种蒽环类抗生素，对各种生长周期的肿瘤细胞都有杀灭作用[1]。盐酸多柔比星为临床一线化疗药，但其稳定性差，血浆半衰期极短并产生较强细胞毒作用如心脏毒性、骨髓抑制及多药耐药性等极大地限制其应用[2-3]。
近年来纳米药物在递送抗肿瘤药物和改善癌症治疗效果方面显现出广阔的前景[4]，其中脂质体因具有靶向、缓释、降低毒性等优点目前已成为抗肿瘤纳米药物主要类别之一，也是临床转化最成功的一类纳米药物[5-6]，1995年上市的盐酸多柔比星脂质体注射液(商品名:Doxil)靶向治疗同时降低了对心脏的毒性。
脂质体常用的制备方法包括薄膜分散法、逆相蒸发法、溶剂注入法、硫酸铵梯度法等[7-8]，采用乙醇注入法结合硫酸铵梯度法制备的盐酸多柔比星脂质体与市售的Doxil具有相似的处方，因此本研究拟通过对比研究两者体外的理化特性，为该制剂的仿制开发、进一步产业化及临床应用提供研究基础。
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材料
FA25 高速剪切仪(弗鲁克公司);Nano-Zs90 纳米粒度及Zeta电位分析仪(英国马尔文有限公司);AH-2020挤出器(ATS);XS204电子天平(METTLER TOLEDO);ME5002T/02电子天平(METTLER);DF-101S加热磁力搅拌器(巩义市予华仪器);SW22恒温水浴振荡槽(Julnbo);AVANTI JXN-26离心机(Beckman Culter..inc，离心半径10.82 cm);色谱柱(Inertsil-OSD-SP-C18(4.6 mm×150 mm，5 um) 试药 Doxil(JANSSEN RES AND DEV，批号HZZT500，规格20mg/10mL);盐酸多柔比星原料药(OLON，批号GS57F);氢化豆磷脂酰胆碱(HSPC)(lipoid，批号--17-01);培化磷脂酰乙醇胺(MPEG2000-DSPE)(lipoid，批号588-01);胆固醇(dishman, batch 批号 116CCG001);硫酸铵(默克， 批号AM0);氯化铵(天津市大茂化学试剂厂，批号);L-组氨酸(默克， 批号K);氯化钠(江苏省勤奋药业有限公司，批号);乙醇为药用级、其他均为分析纯。
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方法与结果
2.1 盐酸多柔比星脂质体的制备
采用乙醇注入法结合硫酸铵梯度法制备盐酸多柔比星脂质体[9]。将958 mg HSPC、319 mg MPEG2000-DSPE和319mg胆固醇加入适量无水乙醇中充分溶解形成类脂溶液，在水浴60℃、13 000 r·min
-1持续高速剪切下将上述类脂溶液直接注入至硫酸铵溶液(250mmol·L-1)中，剪切15 min，得空白脂质体初品;再用挤出器过膜挤出3次得空白脂质体混悬液。然后用蔗糖-组氨酸-盐酸缓冲液(盐酸溶液调节至pH6.5)超滤去除空白脂质体外水相的硫酸铵，最后加入盐酸多柔比星溶液，混匀，65℃水浴振荡槽中孵育60 min，即得盐酸多柔比星脂质体混悬液，除菌过滤后4℃保存备用。